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目的 基于实时无标记细胞分析(real time cellular a-nalysis,RTCA)技术,以黄芩苷、黄芪甲苷、橙皮苷和顺铂为例进行抗A549、H1299肺腺癌活性分析,建立一种反映时间维度变化特征的EC50评价新策略.方法 应用RTCA Software Pro数据分析及GraphPad Prism、Origin Pro做图,分别采用终点法和时间维度表征黄芩苷、黄芪甲苷、橙皮苷、顺铂受试液/药的体外抗A549、H1299肺腺癌活性.结果 ①受试液/药对A549及H1299细胞在24 h、48 h终点法中的EC50值有的存在较大差异.②采用四参数方程拟合曲线的相关系数＞0.9,EC50动态变化相对稳定期(相邻4点EC50线性拟合|斜率|≤1)计算此时间维度内的EC50值.黄芩苷、黄芪甲苷、橙皮苷和顺铂对A549细胞的EC50分别为52.97±1.75μmol·L-1(16～48 h)、62.88±2.91 μmol·L-1(32.25～48 h)、78.84±0.33 μmol·L-1(21.5～29.75 h)、13.57± 1.54 μmol·L-1(27.5～48 h);黄芩苷、黄芪甲苷、橙皮苷和顺铂对H1299细胞的EC5.分别为43.71±1.26 μmol·L1(19.5～48 h)、47.23±1.19 μmol·L-1(14～48 h)、39.45 ±0.24 μmol·L-1(12.75～46.25 h)、25.97±4.76 μmol ·L-1(10.25～48 h).显示受试液/药抗肿瘤起效的时间窗口期不同.结论 基于RTCA技术,选用拟合度好、稳定并带有时间维度特征的EC50数据用于抗肿瘤活性评价将更加精确和合理.此外,这种区分开不同有效时间的抗肿瘤药物方法可为临床联合用药的给药时机提供参考,本思路也将为其他体外相关研究提供借鉴.