慢病毒介导的稳定沉默nm23-H1基因的肺癌细胞株的建立及生物学行为改变-论文-manbet官网登录网

慢病毒介导的稳定沉默nm23-H1基因的肺癌细胞株的建立及生物学行为改变

Lentivirus-mediated Stable Silencing of nm23-H1 Gene in Lung Cancer Cells and the Influence on Biological Behavior

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摘要：

背景与目的 nm23-H1基因是重要的肿瘤转移抑制基因.前期研究发现利用化学合成的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制nm23-H1基因的表达可明显增强肺癌细胞的侵袭力.为了进一步研究nm23-H1基因沉默后的分子生物学机制,本研究利用慢病毒介导的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)建立nm23-H1基因稳定沉默的肺癌细胞株.方法将表达特异性抑制nm23-H1基因shRNA的慢病毒转染人大细胞肺癌细胞株NL9980和肺腺癌细胞株A549,通过嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞株.逆转录PCR、定量PCR及Western blot法检测nm23-Hl基因表达,并通过shRNA抵抗的nm23-H1基因重组质粒转染拯救实验验证,侵袭小室实验检测侵袭力改变.结果逆转录PCR、定量PCR和Western blot法检测稳定转染细胞株NL9980-99和A549-99中nm23-H1基因在mRNA和蛋白水平表达均明显降低；shRNA抵抗的nm23-H1基因重组质粒转染拯救实验重现nm23-H1正常表达；侵袭小室实验显示NL9980-99和A549-99细胞侵袭力明显增强.结论成功建立nm23-H1基因稳定沉默的人大细胞肺癌细胞株NL9980-99和人肺腺癌细胞株A549-99,nm23-H1基因沉默后使NL9980-99和A549-99细胞的侵袭力明显增强.

作者：罗猛 ^[1] 来大兴 ^[2] 弓磊 ^[2] 邱小明 ^[2] 祖玲玲 ^[2] 孙丽亚 ^[2] 吴志浩 ^[2] 周清华 ^[2]

作者单位： 300052天津,天津市肺癌转移与肿瘤微环境重点实验室,天津市肺癌研究所,天津医科大学总manbet官网登录 ;550002贵阳,贵州省人民manbet官网登录胸外科 ^[1] 300052天津,天津市肺癌转移与肿瘤微环境重点实验室,天津市肺癌研究所,天津医科大学总manbet官网登录 ^[2]

期刊：《中国肺癌杂志》2012年15卷3期 139-145页 MEDLINEISTICPKUCSCD

关键词：肺肿瘤慢病毒 RNA 基因

主题词：基因(Genes)细胞(Cells)肺肿瘤(Lung Neoplasms)病毒(Viruses)生物学(Biology)

分类号： R734.2

栏目名称： 基础研究

DOI： 10.3779/j.issn.1009-3419.2012.03.02

发布时间： 2012-07-17

基金项目：

国家自然科学基金重点项目 国家自然科学基金 国家“863”重大项目 国家“973”重大项目 中瑞国际合作项目

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被引：13
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