换一批
换一批甘蔗条点病毒荧光定量PCR检测方法的建立及应用
Establishment and Application of Real-time PCR for Sugarcane Striate Virus
摘要：
[目的]建立一种快速、灵敏、特异的检测甘蔗条点病毒(sugarcane striate virus,SStrV)的SYBR Green I 荧光定量PCR方法.[方法]从SStrV基因组保守区域序列设计特异性扩增引物,构建含有SStrV基因组序列的重组质粒pMD19-T-SStrV-qN作为阳性质粒标准品,以其为模板建立SStrV荧光定量PCR检测方法,并对该方法的灵敏性、特异性、稳定性进行了测试,随后用该方法对甘蔗不同组织部位中SStrV载量进行检测.[结果]将含有SStrV基因组序列的重组质粒按 10 倍比稀释成标准品,将其作为模板进行荧光定量PCR,获得标准曲线y=-3.337 x+38.197,相关系数r2=0.999,说明Cq值与标准品浓度拷贝数的对数呈线性关系;建立的荧光定量PCR最低可以检测到 13 拷贝重组质粒/μL,是普通PCR灵敏度的 100 倍.该方法能特异的检测SStrV,特异性高,组内和组间的变异系数在 0.13%-0.94%之间,表明该方法重复性良好.SStrV的载量在甘蔗的不同组织部位中差异较大,+4 叶中SStrV的载量最高,与其他组织部位达到了显著差异.[结论]建立了能灵敏特异检测SStrV的SYBR Green I 荧光定量PCR方法,明确了+4 叶是甘蔗中SStrV检测的最佳采样部位.
更多
作者：
作者单位：
海南大学热带农林学院,海口 570223
[1]
中国热带农业科学院热带生物技术研究所,海口 571101
[2]
期刊：
《生物技术通报》2024年40卷6期 126-133页
ISTICPKUCSCD
栏目名称：
技术与方法
DOI：
10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2024-0129
发布时间：
2024-07-03
基金项目：
海南省自然科学基金青年基金项目
国家糖料产业技术体系项目
海南省自然科学基金面上项目
- 浏览：3
- 被引：0
- 下载：0
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
